ADAMTS-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403133-ACT

ADAMTS4 codifica a ADAMTS-4 (aggrecanase-1), uma metaloproteinase secretada dependente de zinco que cliva proteoglicanos da matriz extracelular, como agrecano e versicano, regulando assim a renovação da matriz e o remodelamento tecidual. Sua atividade se cruza com vias de sinalização inflamatória e da matriz extracelular que influenciam a homeostase dos condrócitos, a integridade da cartilagem e as interações entre células estromais e a matriz. A expressão desregulada de ADAMTS-4 ou sua atividade proteolítica tem sido associada a processos de degradação da cartilagem e a patologias mais amplas do tecido conjuntivo, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos do sistema musculoesquelético e de microambientes inflamatórios. A ADAMTS-4 também é estudada como moduladora da migração celular e da sinalização dirigida pela matriz por meio de alterações na composição de proteoglicanos.

ADAMTS-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAMTS4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAMTS-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAMTS4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAMTS4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAMTS-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAMTS4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAMTS-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAMTS-4 em células tumorais com expressão de ADAMTS4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.