ADAMTS-10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407094

Panoramica

ADAMTS10 codifica ADAMTS-10, una metalloproteasi secreta zinco-dipendente della famiglia ADAMTS che contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare e all’omeostasi del tessuto connettivo. ADAMTS-10 interagisce con le microfibrille di fibrillina e partecipa al rimodellamento di matrici ricche di proteoglicani, influenzando la segnalazione cellula–matrice e l’architettura tissutale durante lo sviluppo e il mantenimento. La disregolazione di ADAMTS10 è stata associata a disordini ereditari del tessuto connettivo, tra cui la sindrome di Weill–Marchesani, ed è oggetto di studio nel contesto dell’integrità delle microfibrille, dei fenotipi oculari e scheletrici e del rimodellamento della matrice extracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADAMTS10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADAMTS10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADAMTS10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADAMTS-10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADAMTS10 per lo studio della segnalazione di ADAMTS-10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADAMTS10 critici per la funzione di ADAMTS-10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADAMTS10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADAMTS-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ADAMTS-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADAMTS10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADAMTS-10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ADAMTS-10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADAMTS10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADAMTS10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.