ADAM4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418990

Panoramica

Adam4 codifica ADAM4, un membro della famiglia ADAM (a disintegrin and metalloprotease), coinvolta nella proteolisi in prossimità della membrana e nelle interazioni cellula–cellula o cellula–matrice. Le proteine ADAM possono modulare lo shedding del dominio extracellulare di recettori di superficie e molecole di adesione, influenzando la dinamica della segnalazione, gli stimoli infiammatori e il rimodellamento tissutale. Nei sistemi murini, ADAM4 viene studiata nel contesto della regolazione, dipendente da proteasi, dei processi di sviluppo e riproduttivi, nonché della regolazione microambientale del comportamento cellulare. La disregolazione della proteolisi mediata dalla famiglia ADAM è ampiamente rilevante per il rimodellamento patologico e la segnalazione aberrante, offrendo un punto d’ingresso meccanicistico per analizzare fenotipi guidati dalle proteasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adam4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adam4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adam4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADAM4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adam4 per lo studio della segnalazione di ADAM4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adam4 critici per la funzione di ADAM4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adam4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADAM4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ADAM4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adam4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADAM4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ADAM4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adam4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adam4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.