ACTR-I Double Nickaseプラスミド (h): sc-401283-NIC

ACVR1は、TGF-βスーパーファミリーに属するセリン／スレオニンキナーゼ型受容体であるアクチビンA受容体I型（ACTR-I/ALK2）をコードし、BMPリガンドのシグナルをSMAD1/5/8および下流の転写プログラムへと伝達します。ヒト細胞では、ACTR-Iは、正 canonical なBMP–SMADシグナル伝達と、MAPKをはじめとする他の発生関連経路とのクロストークを介して、骨形成および軟骨形成の分化、組織パターニング、ならびに細胞運命決定の制御に関与します。ACVR1活性が異常になるとBMPシグナル伝達の動態が乱れ、進行性骨化性線維異形成症（fibrodysplasia ossificans progressiva）を含む異所性骨化や骨格発生の障害に関与することが示されています。ACVR1はまた、BMP受容体複合体の組み立て、シグナル強度（振幅）の制御、状況依存的な転写出力を研究するための経路ノードとしても用いられます。

ACTR-I ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACVR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACVR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACVR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACVR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。