ACTR-I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418974

Panoramica

Acvr1 codifica il recettore dell’activina A di tipo I (ACTR-I/ALK2), un recettore di tipo I con attività chinasica serina/treonina della superfamiglia del TGF-β che trasduce i ligandi BMP e activina verso SMAD1/5/8 e programmi trascrizionali SMAD-dipendenti a valle. Nelle cellule di topo, ACTR-I contribuisce alla regolazione del patterning dello sviluppo, della differenziazione osteogenica e condrogenica e dell’omeostasi tissutale, integrando la segnalazione dei complessi recettoriali con regolatori di feedback dipendenti dal contesto. La perturbazione della via di ACVR1 è associata a una segnalazione BMP deregolata e a decisioni aberranti sul destino cellulare, rendendola rilevante per studi di biologia scheletrica, rimodellamento di tipo fibrotico e crosstalk della trasduzione del segnale con le vie MAPK e PI3K/AKT. L’analisi sperimentale della funzione di Acvr1 supporta studi meccanicistici sull’attività chinasica del recettore, sulla specificità per i ligandi e sulle reti trascrizionali a valle in contesti fisiologici e in modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-I (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acvr1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acvr1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acvr1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTR-I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acvr1 per lo studio della segnalazione di ACTR-I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acvr1 critici per la funzione di ACTR-I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acvr1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACTR-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACTR-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acvr1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACTR-I Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACTR-I (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acvr1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acvr1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.