Plásmido CRISPR de Activación (h) ACSVL6: sc-405327-ACT

SLC27A5 codifica ACSVL6, una acil‑CoA sintetasa de ácidos grasos de cadena muy larga que cataliza la activación dependiente de ATP de ácidos grasos de cadena larga y muy larga a tioésteres acil‑CoA, un paso clave que regula la utilización de los ácidos grasos. Al controlar la disponibilidad de acil‑CoA, ACSVL6 influye en procesos de manejo lipídico, como la β‑oxidación, la remodelación de triglicéridos y, de forma más amplia, el flujo metabólico a través de las vías de síntesis y degradación de lípidos. Las alteraciones en la activación de ácidos grasos y en el metabolismo de acil‑CoA se asocian con una homeostasis lipídica desregulada, con relevancia para estados de estrés metabólico que afectan vías centradas en el hígado y el equilibrio energético sistémico. Como resultado, SLC27A5 se estudia habitualmente en contextos de metabolismo de lípidos, adaptación energética celular y señalización asociada a enfermedades metabólicas.

ACSVL6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC27A5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACSVL6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC27A5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC27A5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACSVL6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC27A5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACSVL6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACSVL6 en células tumorales con expresión de SLC27A5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.