ACSS1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403211-NIC

ACSS1は、酢酸をアセチルCoAへと変換する反応を触媒するミトコンドリアのアシルCoA合成酵素をコードしており、酢酸の利用をミトコンドリアのエネルギー代謝およびTCA回路を介したアナプレロティック・フラックス（補充的流入）に結び付けている。酸化代謝のためのアセチルCoAを供給し、脂質代謝やケトン体関連経路を支えることで、ACSS1は栄養ストレスや基質利用可能性の変化に伴う代謝の柔軟性に寄与する。酢酸代謝の破綻やミトコンドリアにおけるアセチルCoA産生の異常は、がん生物学で観察される代謝リプログラミング、インスリン抵抗性、ならびに酸化代謝の障害を特徴とするその他の疾患に関する研究とも関連する。そのためACSS1は、ミトコンドリアにおける基質選択、アセチルCoAのコンパートメント化、そしてそれに続くレドックスバランスや細胞のバイオエネルゲティクスへの影響を検討するうえで有用な標的である。

ACSS1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACSS1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACSS1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACSS1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACSS1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。