ACSL5 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-436628-ACT

マウスAcsl5は、長鎖アシルCoA合成酵素ファミリーの一員である5（ACSL5）をコードしており、長鎖脂肪酸をアシルCoAチオエステルへと活性化するミトコンドリア関連酵素です。これにより脂肪酸は、β酸化、トリグリセリド合成、リン脂質リモデリングへと利用される経路に組み込まれます。ACSL5はアシルCoAプールと脂質フラックスを形成することで、ミトコンドリアのエネルギー代謝、膜組成、脂質を介したシグナル伝達に影響を与えます。ACSL5活性の変化は、肝脂肪化やインスリン抵抗性などを含む代謝調節異常と関連づけられており、脂質利用や酸化代謝が細胞のストレス応答に寄与する状況でしばしば研究対象となります。

ACSL5 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Acsl5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACSL5 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Acsl5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAcsl5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACSL5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAcsl5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACSL5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAcsl5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACSL5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。