Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
ACSL4 Double Nickaseプラスミド (m): sc-424503-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ACSL4 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ACSL4ダブルニカースプラスミド（m）およびACSL4ダブルニカースプラスミド（m2）は、Acsl4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ACSL4 抗体 (F-4): sc-365230
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ACSL4 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-424503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSL4 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-424503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのAcsl4は、アラキドン酸やアドレン酸などの多価不飽和長鎖脂肪酸をアシルCoA誘導体へと変換し、膜リン脂質へ取り込ませる酵素である長鎖アシルCoA合成酵素ファミリー4（ACSL4）をコードしています。リン脂質リモデリングや脂質メディエーターの利用可能性を制御することで、ACSL4はフェロトーシス感受性、酸化的脂質代謝、ならびに細胞ストレス応答に関連する膜動態に影響を及ぼします。ACSL4の活性は脂質過酸化や炎症性シグナル伝達を制御する経路と交差しており、その発現や機能の変化は、神経発達に関わる表現型、代謝の恒常性破綻、さらに状況依存的な腫瘍生物学の変化と関連づけられています。これらの特性により、Acsl4はマウスモデル系において、細胞死、レドックス恒常性、膜組成に関わる脂質駆動型メカニズムを解析するための有用な標的となります。
ACSL4 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Acsl4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Acsl4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Acsl4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Acsl4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。