ACSL4 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-424503-ACT

マウスの Acsl4 は、アシル CoA 合成酵素長鎖ファミリー 4（ACSL4）をコードしている。ACSL4 は膜関連酵素であり、長鎖多価不飽和脂肪酸をアシル CoA チオエステルへ変換して活性化し、リン脂質への取り込みや下流の脂質代謝経路へ導く。ACSL4 はリン脂質リモデリングおよびレドックス感受性の高い膜組成を規定する主要因子で、脂質利用を酸化ストレス応答やフェロトーシス感受性と結び付ける。アラキドン酸およびアドレニン酸代謝の制御を介して、ACSL4 は炎症性脂質シグナル、ミトコンドリア機能、ならびに膜ダイナミクスに影響を与える。ACSL4 の活性や発現の変化は、脂質過酸化に駆動される病態と関連することが報告されており、神経変性、代謝機能障害、がん細胞のストレス適応などの文脈で研究されている。

ACSL4 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Acsl4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACSL4 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Acsl4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAcsl4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACSL4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAcsl4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACSL4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAcsl4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACSL4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。