Acrosin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402292-ACT

ヒトACRはアクロシンをコードしており、アクロシンはトリプシン様のセリンプロテアーゼで、成熟精子の先体内にプロアクロシンとして貯蔵されています。先体反応が起こると、アクロシンは透明帯への結合および局所的なタンパク質分解に関与し、卵母細胞を取り囲む構造（卵投資物）への精子侵入を支えます。さらに、先体エキソサイトーシス、プロテアーゼ活性化カスケード、細胞外マトリックスのリモデリングといった受精関連プロセスとも統合的に機能します。アクロシン活性の制御異常や先体機能の障害は、受精能の低下や精子—透明帯相互作用の異常など、男性因子不妊の表現型と関連することが報告されています。生殖細胞に富むプロテアーゼとして、ACRは精子形成、先体形成、精子の機能的成熟を研究するためのマーカーとしても用いられています。

Acrosin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Acrosin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Acrosinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAcrosin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAcrosin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。