ACP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418950

Panoramica

Acp2 codifica la fosfatasi acida lisosomiale 2 (ACP2), un’idrolasi che contribuisce al turnover degli esteri fosfatici all’interno del lume acido dei lisosomi. L’attività di ACP2 supporta la degradazione delle macromolecole dipendente dai lisosomi e si interseca con il traffico endolisosomiale, l’autofagia e le vie di riciclo dei nutrienti cellulari. Un’alterata funzione delle fosfatasi lisosomiali può perturbare l’omeostasi dell’organello ed è rilevante per i meccanismi studiati nella disfunzione lisosomiale e nei fenotipi associati alla neurodegenerazione. Nei modelli murini, Acp2 è utile per esplorare come l’equilibrio degli enzimi lisosomiali influenzi le risposte cellulari allo stress, la funzione delle cellule immunitarie e l’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acp2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acp2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acp2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acp2 per lo studio della segnalazione di ACP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acp2 critici per la funzione di ACP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acp2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acp2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acp2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acp2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.