ACOX1 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-418948-ACT-2

マウスAcox1はアシルCoAオキシダーゼ1（ACOX1）をコードしており、ACOX1はペルオキシソームに局在するフラビンタンパク質として、直鎖脂肪酸アシルCoAのβ酸化における最初の段階かつ律速段階を触媒し、trans-2-エノイルCoAを生成するとともに、ペルオキシソーム依存的な脂質分解に寄与する。ACOX1活性は細胞内の脂質・エネルギー恒常性を支え、ペルオキシソーム生合成、H2O2産生を介した酸化ストレス制御、PPARにより駆動される転写プログラムなどの代謝シグナルネットワークとも連関する。Acox1の機能不全は超長鎖脂肪酸の代謝回転の変化、肝臓への脂質蓄積、炎症、さらに広範なペルオキシソーム代謝表現型と関連しており、脂肪肝疾患の機序や代謝リモデリングの研究において重要である。生体医科学研究モデルにおいて、マウスAcox1の遺伝子編集や遺伝学的撹乱は、ペルオキシソームβ酸化経路、リピドミクスのシグネチャ、ならびにペルオキシソーム機能障害が臓器特異的・細胞種特異的にもたらす影響を解明するうえで有用である。

ACOX1 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Acox1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACOX1 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Acox1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAcox1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACOX1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAcox1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACOX1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAcox1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACOX1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。