ACOT12 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410299-ACT

ヒトACOT12は、アシルCoAチオエステルを遊離脂肪酸とコエンザイムA（CoA）に加水分解するアシルCoAチオエステラーゼをコードしており、細胞内のCoAプールの維持と、脂質由来の代謝フラックスの調節に寄与します。活性化脂肪酸（アシルCoA）と遊離脂肪酸のバランスを調整することで、ACOT12は脂肪酸酸化、脂質リモデリング、さらには全身的なエネルギーホメオスタシスに関わる経路に影響を与えます。ACOT12の発現変動は、代謝リプログラミングや肝臓における脂質調節異常と関連づけられており、脂肪肝、炎症に伴う代謝ストレス、腫瘍関連代謝の研究において重要です。その酵素活性は、アシルCoAの利用可能性がミトコンドリアおよび細胞質での脂質利用をどのように規定するかを解明するための、機構的な切り口を提供します。

ACOT12 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACOT12の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACOT12 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACOT12 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACOT12転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACOT12の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACOT12遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACOT12依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACOT12発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACOT12経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。