ACO2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404434-NIC

ACO2はミトコンドリアのアコニターゼ2をコードしており、TCA（トリカルボン酸）回路においてクエン酸とイソクエン酸の可逆的な異性化反応を触媒する、[4Fe–4S]型の鉄硫黄酵素です。酸化的代謝、NADH産生、ミトコンドリアでのATP産生を支えることで、ACO2はレドックス恒常性と細胞のバイオエネルギー能に寄与します。ACO2の活性は、鉄硫黄クラスターの完全性を介して、ミトコンドリアのストレス応答や活性酸素種に対する感受性とも関連しています。ACO2機能の変化は代謝異常やミトコンドリア病の表現型と関連づけられており、がんや神経変性のモデルにおけるバイオエネルギー再配線を研究するうえで有用な標的となります。

ACO2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACO2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACO2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACO2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACO2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。