ACO2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404434-ACT

ヒトのACO2はミトコンドリア・アコニターゼ2をコードしており、TCA（トリカルボン酸）回路におけるクエン酸からイソクエン酸への異性化反応を触媒する鉄硫黄酵素である。これにより酸化的代謝と、呼吸によるATP産生に必要なNADHの生成が支えられる。炭素フラックスをミトコンドリアのレドックスバランスと結び付けることで、ACO2は活性酸素種（ROS）の処理、アナプレロシス、ならびに栄養利用可能性に応じた代謝適応に影響を与える。ACO2活性の撹乱は、ミトコンドリア機能不全の表現型や生体エネルギー的ストレス応答と関連づけられており、これらは神経変性、ミオパチー、がんに伴う代謝リワイヤリングと交差する。ミトコンドリア代謝の中心的ノードとして、ACO2は低酸素シグナル、酸化的リン酸化能、そして代謝物駆動のエピジェネティック経路やストレス経路の制御という文脈でしばしば研究されている。

ACO2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACO2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACO2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACO2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACO2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。