ACE2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401131-ACT

A enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2) é uma metaloprotease humana de membrana do tipo I que contrabalança a sinalização clássica do sistema renina–angiotensina ao converter a angiotensina II em angiotensina-(1–7), desviando assim a sinalização para vias ligadas ao receptor MAS. Por meio da regulação de peptídeos vasoativos, a ACE2 influencia a homeostase endotelial, a sinalização inflamatória, as respostas ao estresse oxidativo e a remodelação tecidual nos sistemas cardiovascular, renal e pulmonar. A ACE2 também atua como fator de entrada na superfície celular para certos coronavírus, relacionando seus níveis de expressão a estudos de interações hospedeiro–patógeno e da biologia da barreira epitelial. A atividade ou expressão desregulada de ACE2 é frequentemente investigada em modelos de hipertensão, doença cardiovascular, lesão pulmonar aguda e crônica, doença renal e inflamação metabólica.

ACE2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACE2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACE2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACE2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACE2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACE2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACE2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACE2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACE2 em células tumorais com expressão de ACE2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.