Plásmido CRISPR de Activación (h) ACADL: sc-404535-ACT

ACADL codifica la acil‑CoA deshidrogenasa de cadena larga (ACADL), una flavoproteína mitocondrial que cataliza el primer paso de deshidrogenación en la β‑oxidación de acil‑CoA de ácidos grasos de cadena larga. Al controlar el catabolismo de los ácidos grasos, ACADL contribuye a la producción de energía celular, al equilibrio redox y a la flexibilidad metabólica, en particular en tejidos con alta capacidad oxidativa. La alteración de la actividad de ACADL se ha vinculado con un manejo lipídico alterado y disfunción mitocondrial, con relevancia para errores congénitos de la oxidación de ácidos grasos y fenotipos metabólicos y cardiometabólicos más amplios estudiados en modelos celulares humanos.

ACADL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACADL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACADL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACADL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACADL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACADL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACADL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACADL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACADL en células tumorales con expresión de ACADL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.