Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ABHD5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402273-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ABHD5 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ABHD5ダブルニカースプラスミド（h）およびABHD5ダブルニカースプラスミド（h2）は、ABHD5を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ABHD5 抗体 (E-1): sc-376931
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ABHD5 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402273-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABHD5 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402273-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABHD5（CGI-58としても知られる）は、脂肪滴に結合する共活性化因子をコードしており、脂肪組織トリグリセリドリパーゼ（PNPLA2/ATGL）を活性化して細胞内トリグリセリドの加水分解を促進する。脂肪分解、脂肪酸動員、脂肪滴ダイナミクスの制御を通じて、ABHD5はエネルギー恒常性に影響を与え、ミトコンドリアβ酸化や細胞ストレス応答に関連する下流シグナル伝達にも関与する。ABHD5依存的な脂質異化の破綻は中性脂質蓄積の表現型と関連し、肝臓、皮膚、筋組織に影響する代謝調節異常への関与が示唆されている。脂質代謝の中心的な結節点として、ABHD5は脂質蓄積症、炎症に関連した代謝経路、ならびに細胞種特異的な脂肪滴リモデリングの文脈で頻繁に研究されている。
ABHD5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ABHD5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ABHD5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ABHD5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ABHD5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。