ABHD5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402273-ACT

ヒトABHD5（CGI-58としても知られる）は、脂肪滴（リピッドドロップレット）に関連する共活性化因子をコードしており、中性脂質の動員を細胞のエネルギーバランスと結び付ける役割を担います。具体的には、脂肪組織トリグリセリドリパーゼ（ATGL）の活性を刺激し、トリアシルグリセロールの加水分解を促進します。脂肪滴のターンオーバー、脂肪酸フラックス、および下流のミトコンドリアβ酸化を調節することで、ABHD5は代謝恒常性と脂質シグナル伝達の協調に寄与します。ABHD5機能の破綻は、異常な脂質貯蔵や異所性脂質蓄積と関連しており、この経路が遺伝性の中性脂質貯蔵表現型や、より広範な代謝疾患の機序と結び付くことを示しています。がんや炎症の文脈では、ABHD5の影響を受ける脂質代謝および脂肪滴ダイナミクスの変化が膜組成やストレス応答を再構成しうるため、多様なモデル系における経路マッピングの観点からも重要です。

ABHD5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABHD5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABHD5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABHD5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABHD5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABHD5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABHD5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABHD5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABHD5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABHD5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。