ABCG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418933

Panoramica

Abcg1 codifica il trasportatore della famiglia ATP-binding cassette ABCG1, un regolatore chiave dell’omeostasi intracellulare di colesterolo e fosfolipidi che promuove l’efflusso di steroli verso le HDL e supporta il rimodellamento dei lipidi di membrana. Nei macrofagi e in altre cellule coinvolte nella gestione dei lipidi, ABCG1 agisce a valle della segnalazione LXR/RXR e coopera con ABCA1 per controllare il caricamento lipidico, la formazione di cellule schiumose e il tono infiammatorio. Un’alterata attività di Abcg1 è stata associata, in modelli murini, a una deregolazione del metabolismo lipidico, delle risposte allo stress ossidativo e a fenotipi rilevanti per l’aterosclerosi. Inoltre, il bilanciamento lipidico mediato da ABCG1 può influenzare la funzione delle cellule immunitarie e le risposte cellulari allo stress metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ABCG1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Abcg1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Abcg1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Abcg1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ABCG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Abcg1 per lo studio della segnalazione di ABCG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Abcg1 critici per la funzione di ABCG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Abcg1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ABCG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ABCG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Abcg1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ABCG1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ABCG1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Abcg1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Abcg1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.