AATM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403969-ACT

ヒトGOT2は、ミトコンドリア型アスパラギン酸アミノ基転移酵素（AATM）をコードしており、ピリドキサールリン酸依存性酵素として、グルタミン酸／オキサロ酢酸とアスパラギン酸／α-ケトグルタル酸の間の可逆的なアミノ基転移反応を触媒します。AATMはマレート‐アスパラギン酸シャトルの中核構成要素であり、還元当量をミトコンドリア内へ移送することで細胞質とミトコンドリアの酸化還元バランスを連結し、NADH/NAD⁺恒常性の維持を支えます。アミノ酸代謝、TCA回路のアナプレロ―シス（補充反応）、および窒素代謝における役割を通じて、GOT2はミトコンドリアの生体エネルギー代謝と、ヌクレオチド合成に必要なアスパラギン酸の供給に影響を与えます。GOT2に関連する経路の破綻は、増殖性細胞やストレス適応細胞で観察される代謝状態の変化と関連づけられており、代謝リプログラミングやミトコンドリア機能の研究において重要です。

AATM CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GOT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AATM CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GOT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGOT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AATMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGOT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAATM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGOT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAATM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。