A20/TNFAIP3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-423436-LAC

Tnfaip3 codifica A20/TNFAIP3, uma enzima de edição de ubiquitina que encerra a sinalização inflamatória ao restringir a ativação das vias de NF-κB e MAPK a jusante de sinais provenientes do receptor de TNF, de receptores do tipo Toll e do receptor de IL-1. Por meio de atividades coordenadas de desubiquitinação e de ligase de ubiquitina, A20 modula estruturas (“scaffolds”) de ubiquitina ligadas a K63 e M1 em adaptadores-chave como RIPK1, TRAF6 e NEMO, para controlar a produção de citocinas e a sinalização de morte celular. Em sistemas murinos, a atividade alterada de A20 perturba a homeostase imune inata e adaptativa, influenciando respostas nos compartimentos mieloide e linfoide e moldando a inflamação tecidual. Essas funções tornam Tnfaip3 um nó comum de estudo em biologia da inflamação, mecanismos associados à autoimunidade e contextos de sinalização oncogênica nos quais a regulação de NF-κB é central.

As Partículas de Ativação Lentivirais A20/TNFAIP3 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Tnfaip3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais A20/TNFAIP3 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Tnfaip3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de A20/TNFAIP3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Tnfaip3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.