A1Up Double Nickaseプラスミド (h): sc-407973-NIC

UBQLN4（A1Up）は、ポリユビキチン化された基質を分解および品質管理経路へと橋渡しすることでプロテオスタシスに関与する、ユビキチン様アダプタータンパク質をコードしています。A1Upはユビキチン依存的なタンパク質ターンオーバーと関連し、ユビキチン–プロテアソーム系やオートファジーに連動したクリアランスの構成要素と機能的に相互作用して、平常時およびストレス条件下のタンパク質恒常性に影響を与えます。これらの役割を通じて、UBQLN4はプロテオトキシックストレスへの細胞応答、タンパク質凝集、ならびに調節されたタンパク質安定性に依存するシグナル伝達ネットワークの再編成に影響し得ます。ユビキチン介在性のタンパク質品質管理の破綻は、神経変性、がん生物学、その他プロテオスタシス障害が病態に寄与する多くの疾患と広く関連するため、UBQLN4は機構解明研究に有用な標的となります。

A1Up ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UBQLN4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UBQLN4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UBQLN4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UBQLN4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。