A-FABP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400756-ACT

A FABP4 humana codifica a proteína ligadora de ácidos graxos do adipócito (A-FABP), uma chaperona lipídica citosólica que se liga a ácidos graxos de cadeia longa e coordena seu tráfego para vias metabólicas e de sinalização. A A-FABP integra o manejo de lipídios aos programas de diferenciação de adipócitos e conecta o fluxo de ácidos graxos à regulação transcricional, incluindo a comunicação cruzada com redes dependentes de PPAR. Em contextos imunes e estromais, a expressão de FABP4 está associada à sinalização inflamatória e a respostas induzidas por lipídios que influenciam a homeostase tecidual. A atividade desregulada de FABP4 tem sido amplamente estudada na disfunção metabólica associada à obesidade, na resistência à insulina, na aterosclerose e na biologia do microambiente tumoral, como um nó mecanístico que conecta o metabolismo lipídico e a inflamação.

A-FABP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FABP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

A-FABP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FABP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FABP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de A-FABP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FABP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de A-FABP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via A-FABP em células tumorais com expressão de FABP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.