53BP1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400321-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- 53BP1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase 53BP1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase 53BP1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para TP53BP1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:53BP1 Anticorpo (E-10): sc-515841
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
53BP1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400321-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
53BP1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400321-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TP53BP1 codifica a 53BP1, um fator de resposta a danos no DNA associado à cromatina que se acumula em quebras de dupla fita por meio do reconhecimento de marcas de histonas e da cooperação com sensores a montante, como o ATM. A 53BP1 promove a junção de extremidades não homólogas (NHEJ) e limita a resseção das extremidades do DNA, influenciando assim a escolha da via de reparo em oposição à recombinação homóloga dependente de BRCA1. Por meio dessas atividades, ela sustenta a estabilidade do genoma, a progressão da fase S e a sinalização de checkpoints, e sua desregulação está implicada na carga mutacional e em rearranjos cromossômicos observados em múltiplos contextos de câncer. TP53BP1 também é amplamente utilizado como leitura funcional da formação de focos de dano ao DNA e da competência de reparo em estudos de estresse replicativo e respostas genotóxicas.
53BP1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TP53BP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TP53BP1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TP53BP1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TP53BP1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.