3632451O06RikCRISPR激活质粒(m): sc-426549-ACT

小鼠 3632451O06Rik 编码一种在很大程度上尚未表征、功能注释有限的蛋白，因此是用于绘制基因调控网络以及解析情境依赖性细胞表型的有用靶点。新近的转录本层面证据提示，3632451O06Rik 可能参与细胞状态控制过程，例如增殖、应激适应与分化；在这些过程中，即便是适度的表达变化也可能改变通路输出。由于该基因尚未被充分纳入整理完善的信号通路图谱中，进行可控的扰动对于将 3632451O06Rik 的表达与下游转录程序及蛋白互作模块建立联系具有重要价值。此类研究可通过识别其与炎症、神经生物学以及肿瘤模型等情境中观察到的异常基因表达特征之间的关联，来支持疾病相关生物学研究，但不暗示任何临床用途。

3632451O06Rik CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性3632451O06Rik的表达。

3632451O06Rik CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的3632451O06Rik基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于3632451O06Rik转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性3632451O06Rik表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的3632451O06Rik位点，并能够研究内源性位点上依赖于3632451O06Rik的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在3632451O06Rik表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟3632451O06Rik通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。