3β-HSD2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400991-NIC

HSD3B2は、ヒト3β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素2型（3β-HSD2）をコードする。3β-HSD2はNAD⁺依存性酵素であり、Δ5-3β-ヒドロキシステロイドをΔ4-ケトステロイドへ酸化的に変換する反応を触媒する。これはステロイド生成（ステロイドホルモン生合成）における重要な段階である。この活性は、副腎および性腺におけるプロゲステロン、アンドロステンジオン、ならびに糖質コルチコイド・鉱質コルチコイド・性ステロイド経路に必要な関連前駆体の生合成を支える。3β-HSD2の機能は、ミトコンドリアおよび小胞体にまたがるステロイド生成ネットワークや、内分泌のフィードバックシグナル伝達と密接に結び付いている。HSD3B2の活性または発現の変化は、ステロイド生合成の先天異常やステロイド不均衡に伴う表現型と関連しており、副腎および生殖生物学の機序研究において重要である。

3β-HSD2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSD3B2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSD3B2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSD3B2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSD3B2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。