17β-HSD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403863-ACT

HSD17B3 codifica a 17β-HSD3, uma oxidorredutase microssomal que catalisa a conversão de androstenediona em testosterona dependente de NADPH, uma etapa-chave na biossíntese de andrógenos. Essa enzima atua principalmente em tecidos esteroidogênicos e ajuda a regular os efeitos de sinalização do receptor de andrógenos que influenciam o desenvolvimento sexual e a fisiologia reprodutiva. Alterações na atividade de HSD17B3 perturbam a homeostase dos hormônios esteroides e têm sido associadas a distúrbios do desenvolvimento sexual e a uma desregulação endócrina mais ampla. Em sistemas experimentais, HSD17B3 constitui um alvo acessível para estudar o metabolismo de esteroides, a produção intracrina de andrógenos e a interação entre vias esteroidogênicas e programas transcricionais.

17β-HSD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HSD17B3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

17β-HSD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HSD17B3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HSD17B3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de 17β-HSD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HSD17B3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de 17β-HSD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via 17β-HSD3 em células tumorais com expressão de HSD17B3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.