17β-HSD13 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-415608-ACT

HSD17B13 kodiert 17β-HSD13, ein in der Leber stark angereichertes Mitglied der Familie der Hydroxysteroid-17β-Dehydrogenasen, das mit dem zellulären Lipidstoffwechsel sowie der redoxabhängigen Verarbeitung von Steroiden/Retinoiden in Verbindung gebracht wird. Das Protein lokalisiert überwiegend an Lipidtröpfchen in Hepatozyten und steht im Zusammenhang mit der Regulation der Lipidtröpfchen-Homöostase, dem Fettsäure-Handling und metabolischen Stressantworten in hepatischen Signal- und Stoffwechselwegen. Genetische und Expressionsstudien bringen HSD17B13 mit Anfälligkeit und Progression von Lebererkrankungs-Phänotypen in Verbindung, darunter steatoseassoziierte Schädigungen und entzündliche Lebererkrankungen. Dadurch dient HSD17B13 als funktionaler Einstiegspunkt für mechanistische Studien, die den hepatischen Stoffwechsel, die Dynamik der Lipidspeicherung und zelluläre Zustände mit Relevanz für die Leberpathologie miteinander verknüpfen.

17β-HSD13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HSD17B13-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

17β-HSD13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HSD17B13-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HSD17B13-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen 17β-HSD13-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HSD17B13-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von 17β-HSD13-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des 17β-HSD13-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HSD17B13-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.