17β-HSD13 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415608-ACT

HSD17B13は17β-HSD13をコードしており、細胞内脂質代謝およびレドックス依存的なステロイド／レチノイド処理に関与するとされる、ヒドロキシステロイド17β-デヒドロゲナーゼ（17β-HSD）ファミリーの肝臓高発現メンバーです。このタンパク質は主として肝細胞の脂肪滴に局在し、脂肪滴恒常性の制御、脂肪酸の取り扱い、ならびに肝臓の経路における代謝ストレス応答の調節と関連付けられています。遺伝学的研究および発現解析により、HSD17B13は脂肪肝に関連する障害や炎症性肝疾患などを含む肝疾患表現型の感受性および進行と関連することが示されています。その結果、HSD17B13は、肝代謝、脂質貯蔵ダイナミクス、そして肝病態に関連する細胞状態を結び付ける機構研究のための機能的な入り口（切り口）となります。

17β-HSD13 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HSD17B13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

17β-HSD13 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HSD17B13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHSD17B13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性17β-HSD13の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHSD17B13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座における17β-HSD13依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHSD17B13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞における17β-HSD13経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。