15-LO Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401591-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- 15-LOO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase 15-LO (h) e o Plasmídeo Double Nickase 15-LO (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ALOX15. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:15-LO Anticorpo (B-7): sc-133085
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
15-LO Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401591-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
15-LO Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401591-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O ALOX15 humano codifica a 15-lipoxigenase-1 (15-LO), uma dioxigenase de ferro não heme que catalisa a oxigenação de ácidos graxos poli-insaturados, como o ácido araquidônico e o ácido linoleico, gerando 15-HETE e 13-HODE. Esses mediadores lipídicos moldam redes de eicosanoides e de lipídios pró-resolução especializados, que influenciam a sinalização inflamatória, o equilíbrio redox e a remodelação de lipídios de membrana. A atividade de ALOX15 está implicada na polarização de macrófagos, na diferenciação epitelial e nas respostas ao estresse oxidativo, por meio de interações com vias que incluem NF-κB, sinalização por PPAR e o metabolismo lipídico regulado por citocinas. A expressão ou atividade desregulada de 15-LO tem sido associada a distúrbios inflamatórios, processos ateroscleróticos e papéis dependentes do contexto na biologia tumoral, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização dirigida por lipídios.
15-LO O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ALOX15 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ALOX15. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ALOX15. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ALOX15 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.