CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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14-3-3 η Double Nickaseプラスミド (h): sc-402892-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- 14-3-3 η Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- 14-3-3 ηダブルニカースプラスミド（h）および14-3-3 ηダブルニカースプラスミド（h2）は、YWHAHを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: 14-3-3 η 抗体 (6A12): sc-293464
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
14-3-3 η Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402892-NIC | 20 µg | $410.00 |
YWHAHはヒト14-3-3ηアダプタータンパク質をコードしており、リン酸化セリン／リン酸化スレオニンモチーフに結合して多様なクライアントタンパク質の局在、安定性、活性を制御する、保存性の高いファミリーの一員です。これらの相互作用を通じて14-3-3ηは、細胞周期の進行、アポトーシス、ストレス応答、細胞骨格の組織化を制御するシグナル伝達ノードを統合し、MAPK/ERK、PI3K–AKTなどのキナーゼ駆動型経路と強く結び付いています。リン酸化依存的な複合体形成を調節することで、YWHAHは神経発生やシナプス機能に加え、全般的なプロテオスタシスおよびシグナル伝達の忠実性にも寄与します。14-3-3ファミリーのシグナル伝達の破綻は、神経精神疾患や神経変性の表現型、ならびにがん生物学に関連する増殖・生存プログラムの変化と関連付けられており、そのためYWHAHは機序解明を目的とした経路研究の有用な標的となります。
14-3-3 η ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における YWHAH 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、YWHAH内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、YWHAHの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、YWHAHが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。