Plásmido CRISPR de Activación (h) γPAK: sc-401595-ACT

PAK2 codifica la quinasa humana de serina/treonina γPAK, un efector sensible a Rac1/Cdc42 que coordina la remodelación del citoesqueleto de actina, el recambio de adhesiones focales y la motilidad celular direccional. γPAK integra señales de las GTPasas de la familia Rho para regular programas transcripcionales asociados a MAPK, la progresión del ciclo celular y vías de respuesta al estrés que influyen en la apoptosis y la supervivencia. Mediante la fosforilación de sustratos aguas abajo implicados en la dinámica del citoesqueleto y en andamiajes de señalización, PAK2 contribuye a modelar procesos como la migración dependiente de adhesión y el tráfico de membrana. La actividad o expresión desregulada de PAK2 se ha vinculado con fenotipos proliferativos e invasivos alterados en biología del cáncer, así como con perturbaciones más amplias en redes de señalización relevantes en contextos inflamatorios y del neurodesarrollo.

γPAK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

γPAK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de γPAK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de γPAK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía γPAK en células tumorales con expresión de PAK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.