γ-GCSc Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420573-ACT

O gene **Gclc** de camundongo codifica a subunidade catalítica da ligase glutamato-cisteína (γ-GCSc), a enzima limitante da velocidade na biossíntese de glutationa (GSH). Ao controlar os estoques celulares de GSH, a γ-GCSc regula a homeostase redox, a desintoxicação de eletrófilos e xenobióticos e a defesa antioxidante a jusante da sinalização NRF2/KEAP1. A atividade de **Gclc** influencia a função mitocondrial, a sinalização inflamatória e a suscetibilidade ao estresse oxidativo em diversos tecidos, relacionando sua desregulação a vias implicadas em lesão hepática, neurodegeneração, disfunção metabólica e adaptação redox associada ao câncer. Como um nó central no metabolismo de tióis, **Gclc** é frequentemente investigado em estudos de sensibilidade à ferroptose, resposta a fármacos e programas transcricionais induzidos por estresse.

γ-GCSc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gclc sem alterar a sequência de ADN subjacente.

γ-GCSc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gclc em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gclc, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de γ-GCSc. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gclc nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de γ-GCSc no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via γ-GCSc em células tumorais com expressão de Gclc silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.