γ1 Tubulin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400327-ACT

TUBG1 はヒト γ1チューブリンをコードしており、γ-チューブリン環状複合体（γ-tubulin ring complex; γ-TuRC）の中核構成要素として、中心体やその他の微小管形成中心（MTOC）において微小管の核形成を担います。γ1チューブリンは、有糸分裂紡錘体の組み立て、中心体の完全性、細胞周期の進行を支えることで、染色体分配と正確な細胞分裂の協調に寄与します。TUBG1 依存的な微小管動態は、細胞骨格の組織化、細胞内輸送、ならびに中心体機能の高い精密さを要する神経発生プロセスを制御する経路と交差します。微小管の核形成や紡錘体力学の破綻は、ゲノム不安定性や増殖性表現型と関連するため、TUBG1 は細胞分裂に結びついた疾患生物学を研究する上で有用な結節点となります。

γ1 Tubulin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TUBG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γ1 Tubulin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TUBG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTUBG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γ1 Tubulinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTUBG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγ1 Tubulin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTUBG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγ1 Tubulin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。