δ-catenin Double Nickaseプラスミド (h): sc-402493-NIC

CTNND2はヒトのδ-カテニン（p120-カテニンファミリーの一員）をコードする遺伝子であり、アドヘレンスジャンクションに豊富に局在する細胞質アダプターとして、カドヘリン–カテニン複合体の安定性を調節し、細胞間接着をアクチン細胞骨格のダイナミクスと結び付けます。δ-カテニンは、RhoファミリーGTPアーゼの制御因子やジャンクションの足場タンパク質との相互作用などを介して、神経突起の伸長、シナプス構築、細胞運動性を制御するシグナル伝達経路に関与します。CTNND2の発現異常やゲノム破綻は神経発達に関わる表現型と関連づけられており、さらに接着のリモデリングが重要となる上皮可塑性や腫瘍生物学の文脈でも検討されています。これらの特性により、CTNND2はジャンクションシグナル、神経形態形成、ならびに接着を転写・細胞骨格プログラムへ結び付ける機構を研究するうえで有用な標的となります。

δ-catenin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CTNND2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CTNND2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CTNND2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CTNND2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。