Plásmido CRISPR de Activación (h) β-defensin 124: sc-410392-ACT

DEFB124 codifica la β-defensina 124 humana, un pequeño péptido catiónico de la familia de las defensinas que contribuye a la inmunidad innata epitelial mediante actividad antimicrobiana directa y la modulación de las respuestas inflamatorias locales. Las β-defensinas participan en los procesos de la barrera mucosa y pueden influir en la señalización quimiotáctica y en las redes de citocinas que determinan el reclutamiento de leucocitos y las interacciones huésped–microbio. Los patrones alterados de expresión de defensinas se han asociado con una inmunidad mucosa desregulada y estados inflamatorios crónicos, lo que respalda la investigación de DEFB124 en la biología de las infecciones y la homeostasis inmunitaria. En contextos del tracto reproductor y urogenital, los miembros de la familia de las defensinas también se estudian por sus funciones en el mantenimiento de la integridad de la barrera y el equilibrio del microbioma.

β-defensin 124 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DEFB124 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-defensin 124 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DEFB124 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DEFB124, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-defensin 124. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DEFB124 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-defensin 124 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-defensin 124 en células tumorales con expresión de DEFB124 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.