β-casein Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419848

Panoramica

Csn2 codifica la β-caseina murina, una delle principali fosfoproteine secrete dalle cellule epiteliali mammarie, che contribuisce all’assemblaggio delle micelle di caseina e al trasporto di calcio e fosfato nel latte. La sua espressione è finemente regolata durante la gravidanza e l’allattamento dai segnali della prolattina e dei glucocorticoidi, in particolare tramite JAK2/STAT5 e programmi trascrizionali cooperanti che coordinano la differenziazione della ghiandola mammaria e la funzione secretoria. Poiché la β-caseina è un marcatore canonico della differenziazione lattogenica, la perturbazione di Csn2 è ampiamente utilizzata per studiare il controllo endocrino della maturazione epiteliale, della secrezione proteica e dell’omeostasi del calcio. Le alterazioni nella regolazione dei geni della caseina sono inoltre utili per modellare stati di sviluppo mammario disregolati e per valutare come segnali ormonali e infiammatori rimodellino il trascrittoma delle proteine del latte.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β-casein (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Csn2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Csn2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Csn2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β-casein.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Csn2 per lo studio della segnalazione di β-casein, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Csn2 critici per la funzione di β-casein
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Csn2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal β-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Csn2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β-casein Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR β-casein (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Csn2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Csn2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.