βB1-crystallin Double Nickaseプラスミド (h): sc-403361-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- βB1-crystallin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- βB1-crystallinダブルニカースプラスミド（h）およびβB1-crystallinダブルニカースプラスミド（h2）は、CRYBB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: βB1-crystallin 抗体 (A-8): sc-374496
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
βB1-crystallin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403361-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
βB1-crystallin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403361-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYBB1はヒトのβB1-クリスタリンをコードしており、βB1-クリスタリンは眼の水晶体の主要な構造タンパク質として、視覚に必要な高い屈折率と長期的な透明性の維持に寄与します。βB1-クリスタリンは、他のβ/γ-クリスタリンと安定したオリゴマーを形成することでクリスタリンのタンパク質ネットワークに関与し、水晶体線維細胞の構築とタンパク質恒常性を支えます。クリスタリンの集合が破綻したり凝集しやすくなったりすると水晶体の透明性が損なわれ得るため、CRYBB1はプロテオスタシス、ストレス応答、加齢に伴う水晶体生物学の変化を研究するうえで重要な座位となります。βB1-クリスタリンの安定性や可溶性に影響するバリアントは遺伝性白内障の表現型と関連づけられており、眼モデルにおける機序研究のための遺伝学的背景を提供します。
βB1-crystallin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CRYBB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CRYBB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CRYBB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CRYBB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。