β3Gn-T3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-411457-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- β3Gn-T3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- β3Gn-T3ダブルニカースプラスミド（h）およびβ3Gn-T3ダブルニカースプラスミド（h2）は、B3GNT3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
β3Gn-T3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-411457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β3Gn-T3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-411457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
B3GNT3 は、ヒトの糖転移酵素 β3Gn-T3 をコードしており、β3Gn-T3 はゴルジ体に局在する酵素として、糖鎖受容体に対して β1,3 結合の N-アセチルグルコサミン転移を触媒し、糖タンパク質および糖脂質上のポリ-N-アセチルラクトサミン構造の伸長に関与します。N 型および O 型糖鎖の伸長・修飾の制御を通じて、β3Gn-T3 は糖タンパク質の成熟、レクチン結合、ならびに接着やシグナル伝達に影響する細胞―細胞／細胞―マトリックス相互作用に寄与します。B3GNT3 の発現量や活性の変化は、腫瘍に伴う糖鎖リモデリングや免疫関連過程など、複数の病態コンテキストで報告されている糖鎖パターンの変化と関連付けられています。そのため、B3GNT3 は、ゴルジ体における糖鎖付加ネットワーク、受容体トラフィッキング、細胞外マトリックス相互作用を解析する糖鎖生物学のワークフローで頻繁に研究対象となっています。
β3Gn-T3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における B3GNT3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、B3GNT3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、B3GNT3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、B3GNT3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。