β3Gn-T1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411554-ACT

B4GAT1は、β3Gn-T1という糖転移酵素をコードしており、糖鎖の伸長に寄与するβ1,3-N-アセチルグルコサミン転移反応を触媒することで、糖鎖複合体（グリココンジュゲート）の合成およびリモデリングを支えます。タンパク質および脂質の糖鎖修飾における役割を介して、β3Gn-T1は膜輸送、受容体の組織化、細胞外マトリックスとの相互作用に影響し、細胞間コミュニケーションや接着依存的なシグナル伝達を形作ります。B4GAT1を含む糖鎖修飾プログラムの変化は、発生過程での制御や疾患に伴う糖鎖組成の変動といった文脈で研究されており、細胞表面の糖タンパク質の変化が免疫認識やシグナル伝達ネットワークに影響を及ぼし得ます。これらの特性により、B4GAT1は、糖鎖修飾依存的な経路調節や細胞表面糖鎖に関連する表現型を研究するための有用な標的となります。

β3Gn-T1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性B4GAT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

β3Gn-T1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における B4GAT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はB4GAT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性β3Gn-T1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のB4GAT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるβ3Gn-T1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびB4GAT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるβ3Gn-T1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。