β2B Tubulin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400059-ACT

TUBB2Bはヒトβ2Bチューブリンをコードしており、神経細胞で豊富に発現するβチューブリンのアイソタイプです。β2Bチューブリンはαチューブリンとヘテロ二量体を形成して微小管を構成し、細胞骨格の構築、細胞内輸送、有糸分裂紡錘体のダイナミクスを支えます。発生期および成熟期の神経系において、β2Bチューブリンは、微小管依存的なプロセスやモータータンパク質・微小管結合タンパク質との協調を通じて、神経突起の伸長、軸索誘導、神経細胞移動に寄与します。チューブリンのアイソタイプ組成によって制御される微小管ダイナミクスは、Rho GTPaseシグナル伝達や中心体を介した組織化など、細胞極性や細胞分裂を制御する経路とも交差します。TUBB2Bの病的変異や発現制御の破綻は、皮質構築の異常や神経細胞分化の障害を特徴とする神経発達障害と関連づけられており、神経モデルにおける作用機序研究において重要な標的となります。

β2B Tubulin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TUBB2Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

β2B Tubulin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TUBB2B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTUBB2B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性β2B Tubulinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTUBB2B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるβ2B Tubulin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTUBB2B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるβ2B Tubulin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。