β1 Tubulin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400113-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- β1 Tubulin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- β1 Tubulinダブルニカースプラスミド（h）およびβ1 Tubulinダブルニカースプラスミド（h2）は、TUBB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: β1 Tubulin 抗体 (908G2X): sc-517652
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
β1 Tubulin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β1 Tubulin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBB1はヒトβ1チューブリンをコードしており、造血系細胞系列で高発現するβチューブリンのアイソタイプです。β1チューブリンはαチューブリンと重合して、細胞骨格の構築や細胞内輸送に不可欠な微小管を形成します。巨核球および血小板では、β1チューブリンがプロプレートレット形成、血小板の形態変化、ならびに微小管リングの完全性を支え、細胞骨格ダイナミクス、小胞輸送、細胞分裂過程と関連しています。微小管の組み立てやβ1チューブリン発現が撹乱されると、巨核球形成および血小板産生が障害され得ます。また、TUBB1のバリアントは遺伝性血小板疾患や血小板機能表現型の変化と関連することが知られています。微小管ネットワークの構造的構成要素として、β1チューブリンは、有糸分裂紡錘体の組織化、細胞骨格リモデリング、ならびに血液疾患モデルにおける遺伝子型—表現型の関連解析の研究においても重要です。
β1 Tubulin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TUBB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TUBB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TUBB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TUBB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。