β1-Syntrophin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405993-ACT

SNTB1は、ジストロフィン関連タンパク質複合体（dystrophin-associated protein complex：DAPC）に含まれる細胞骨格アダプターであるβ1-シントロフィンをコードし、形質膜上でシグナル伝達タンパク質を足場化（スキャフォールド化）します。β1-シントロフィンはPDZドメインを介して、膜受容体やイオンチャネルをアクチンに富む構造と結び付けるマイクロドメインを編成し、興奮性組織・非興奮性組織の双方において、細胞接着、メカノトランスダクション、シグナル伝達などの過程を形作ります。SNTB1依存的な複合体は、一酸化窒素（NO）シグナル伝達やチャネル局在に関連する経路に影響を与え、膜の安定性と制御された細胞応答に寄与します。ジストロフィン複合体の構成要素や関連する足場化ネットワークの破綻は、神経筋および心筋症様の表現型に関与するとされており、SNTB1は疾患関連の膜シグナル伝達と細胞骨格構築を調べる上で重要な標的です。

β1-Syntrophin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SNTB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

β1-Syntrophin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SNTB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSNTB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性β1-Syntrophinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSNTB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるβ1-Syntrophin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSNTB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるβ1-Syntrophin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。