β1-Adaptin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402948-ACT

AP1B1はβ1-アダプチンをコードしており、これはトランスゴルジネットワークおよびエンドソームにおいて、貨物（カーゴ）の認識をクラスリン依存性の小胞形成に結び付けるアダプタータンパク質1（AP-1）複合体の中核サブユニットです。AP-1は膜貫通タンパク質に存在するソーティングモチーフに結合することで、極性輸送、エンドソームリサイクリング、ならびに上皮細胞・神経細胞の膜組成の維持を協調的に制御します。AP-1依存的輸送が破綻すると、受容体の局在やシグナル出力が乱れ、AP1B1の機能障害が細胞極性、神経発生過程、膜タンパク質恒常性の異常と関連することが示唆されます。細胞内輸送の中心的な結節点として、β1-アダプチンはエンドソーム—ゴルジ動態、カーゴ選別の忠実性、オルガネラ間コミュニケーションの文脈で頻繁に研究されています。

β1-Adaptin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AP1B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

β1-Adaptin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AP1B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAP1B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性β1-Adaptinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAP1B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるβ1-Adaptin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAP1B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるβ1-Adaptin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。