α_1D-AR Double Nickaseプラスミド (h): sc-402904-NIC

ADRA1D はヒトの α1D アドレナリン受容体（α1D-AR）をコードしている。α1D-AR は G タンパク質共役型受容体（GPCR）であり、主として Gq/11 を介してシグナルを伝達し、ホスホリパーゼ C を活性化して細胞内 Ca2+ 濃度を上昇させ、PKC 依存的な転写プログラムを誘導する。α1D-AR は平滑筋の収縮性と血管緊張の維持に関与し、下流の MAPK/ERK シグナル、イオンチャネル活性、ならびに Ca2+ 依存的遺伝子発現を調節する。受容体活性は自律神経系のシグナルネットワーク内でカテコールアミン入力を統合し、応答性組織における細胞増殖やリモデリング・プログラムに影響し得る。ADRA1D に関わるアドレナリン作動性シグナルの破綻は、心血管系および泌尿生殖器系の生理に加え、GPCR 駆動の Ca2+ シグナルが炎症や細胞状態の遷移に影響するより広い文脈でも検討されている。

α1D-AR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADRA1D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADRA1D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADRA1Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADRA1Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。