α1D-AR Plasmide Double Nickase (h): sc-402904-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α1D-AR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il α1D-AR Double Nickase Plasmid (h) e il α1D-AR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADRA1D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: α1D-AR Antibody (F-10): sc-390884
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α1D-AR Plasmide Double Nickase (h) | sc-402904-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α1D-AR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402904-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADRA1D codifica il recettore adrenergico umano α1D (α1D-AR), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che segnala preferenzialmente attraverso Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, aumentare il Ca2+ intracellulare e stimolare programmi trascrizionali dipendenti dalla PKC. L’α1D-AR contribuisce alla contrattilità della muscolatura liscia e al tono vascolare e modula a valle la segnalazione MAPK/ERK, l’attività dei canali ionici e l’espressione genica Ca2+-dipendente. L’attività del recettore integra gli input catecolaminergici all’interno delle reti di segnalazione autonoma e può influenzare programmi di proliferazione cellulare e rimodellamento nei tessuti responsivi. La disregolazione della segnalazione adrenergica che coinvolge ADRA1D è stata studiata nella fisiologia cardiovascolare e urogenitale e in contesti più ampi in cui la segnalazione Ca2+ guidata dai GPCR influisce sull’infiammazione e sulle transizioni di stato cellulare.
α1D-AR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADRA1D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADRA1D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADRA1D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADRA1D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.