α-SNAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403996-ACT

NAPAはヒトα-SNAP（可溶性NSF付着タンパク質）をコードしており、α-SNAPはSNARE複合体に結合し、NSFと協調してATP依存的なSNAREの解離を駆動することで、小胞のドッキングと膜融合を繰り返し行えるようにします。このシャペロン様機能を通じて、α-SNAPは恒常性および調節性のエキソサイトーシス、エンドサイトーシス、ならびにゴルジ体から小胞体（ER）への輸送を支え、分泌、受容体リサイクリング、オルガネラの恒常性に影響します。NAPA依存的なSNAREサイクリングの攪乱は、プロテオスタシスや膜動態を乱し得ますが、これらの過程はシナプス機能やストレス応答とも交差します。小胞輸送の異常やSNARE複合体のターンオーバーの破綻は、神経変性疾患および神経発達疾患の病態機構に関与するとされており、α-SNAPは細胞内輸送を経路（パスウェイ）に焦点を当てて解析する研究において有用な結節点となります。

α-SNAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NAPAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

α-SNAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NAPA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNAPA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性α-SNAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNAPA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるα-SNAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNAPA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるα-SNAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。