α-sarcoglycan Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403837

Panoramica

SGCA codifica l’α-sarcoglicano umano, un componente fondamentale del sottocomplesso dei sarcoglicani all’interno del complesso delle glicoproteine associate alla distrofina, che stabilizza la membrana della cellula muscolare durante la contrazione. Collegando la matrice extracellulare al citoscheletro corticale, l’α-sarcoglicano sostiene l’integrità del sarcolemma, la meccanotrasduzione e l’organizzazione di microdomini di membrana coinvolti nell’omeostasi muscolare. L’alterazione di SGCA compromette l’assemblaggio del complesso della distrofina, aumenta la suscettibilità al danno indotto dalla contrazione e modifica a valle la segnalazione da stress e quella infiammatoria nel muscolo scheletrico e cardiaco. Le varianti loss-of-function sono associate a fenotipi di distrofia muscolare dei cingoli, rendendo SGCA un bersaglio ampiamente utilizzato per modellare l’instabilità della membrana muscolare e le vie correlate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-sarcoglycan (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SGCA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SGCA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SGCA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-sarcoglycan.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SGCA per lo studio della segnalazione di α-sarcoglycan, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SGCA critici per la funzione di α-sarcoglycan
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SGCA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SGCA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-sarcoglycan Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α-sarcoglycan (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SGCA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SGCA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.