Plásmido CRISPR de Activación (h) α-protein kinase 2: sc-414073-ACT

ALPK2 (quinasa 2 de proteínas α) es una quinasa humana atípica de serina/treonina de la familia de las alfa-quinasas, caracterizada por fosforilar sustratos dentro de regiones proteicas estructuradas en lugar de motivos canónicos de quinasas. Se ha vinculado con la regulación de la organización del citoesqueleto y la dinámica de la adhesión celular, lo que implica a ALPK2 en procesos como el control de la forma celular, la migración y la integridad tisular. A través de estas funciones, ALPK2 se estudia en redes de señalización que coordinan la mecanotransducción y las respuestas celulares al estrés. En entornos de investigación, la expresión o función alterada de ALPK2 se ha asociado con fenotipos relacionados con el cáncer y otras patologías en las que una proliferación, motilidad u organización epitelial desreguladas contribuyen a la biología de la enfermedad.

α-protein kinase 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ALPK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α-protein kinase 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ALPK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ALPK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α-protein kinase 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ALPK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α-protein kinase 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α-protein kinase 2 en células tumorales con expresión de ALPK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.