Plásmido CRISPR de Activación (h) α-parvin: sc-405769-ACT

PARVA codifica la α-parvina, un adaptador de adhesiones focales que vincula la señalización de integrinas con el citoesqueleto de actina mediante interacciones con la quinasa ligada a integrinas (ILK) y las proteínas PINCH. Al organizar el complejo ILK–PINCH–parvina, la α-parvina ayuda a coordinar la adhesión, el esparcimiento y la migración celular, influyendo en vías de mecanotransducción y de remodelación del citoesqueleto. Por lo tanto, la actividad de PARVA es relevante para procesos como la detección de la matriz extracelular, la dinámica de los lamelipodios y la señalización de supervivencia celular. La desregulación de la señalización de adhesiones focales que involucra a PARVA se ha asociado con una arquitectura tisular alterada y comportamientos celulares invasivos, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar fenotipos dependientes de la adhesión en modelos relevantes para enfermedades.

α-parvin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PARVA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α-parvin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PARVA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PARVA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α-parvin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PARVA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α-parvin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α-parvin en células tumorales con expresión de PARVA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.